CRISPR再升级,活细胞内实时看到基因编辑变化( 二 )

而这次新增的工具,CRISPR活细胞荧光原位杂交(CRISPR LiveFISH)技术,可以实时研究活细胞中的各种染色体功能。

具体来说,研究者将核酸酶沉默的dCas9分子和向导RNA分别带上荧光蛋白和荧光染料,并将两者组装,靶向并标记活细胞中的基因组序列。

CRISPR再升级,活细胞内实时看到基因编辑变化

▲在活细胞中进行基因组成像和细胞遗传学检测的LiveFISH示意图(图片来源:参考资料[1])

应用这种新技术,研究人员可以准确地检测染色体疾病。例如有一种叫Patau综合征的疾病,患者的13号染色体比常人多了一条。而在患者的单个羊水细胞中,LiveFISH可以清晰地显示出3个荧光信号,表明染色体数量的异常。

此外,LiveFISH可以实时监测CRISPR-Cas9引起的DNA双链断裂动态变化。在基因组的特定位置,研究人员通过观察DNA双链断裂处的荧光信号,可以知道该处正在活跃地反复进行基因修复,并且这一动态过程可持续数小时。

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