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亲爱的小伙伴们 ， 大家好 ， 今天我们要讲解的是 ， 细胞培养的原理和步骤 ， 简单好用以及精确 ， 学完之后 ， 相信你对细胞培养将不再陌生 。 接下来就开始今天的学习吧！
细胞培养:体外模拟体内需要的生长条件（温度 ， 营养等） ， 然后加上一些处理条件 ， 比如做药物筛选 ， 就可以做抗性基因的表达的筛选 ， 比如还可以测定某个基因敲低或是过表达的产物 ， 这个当然要结合WB来看最后基因的表达产物是否升高哦 ， 细胞培养的应用还有很多 ， 欢迎大家在后台留言 。
细胞培养的基本原理：细胞传代（生存空间和营养不足 ， 长得太密 ， 代谢废物太多 ， 要洗洗 ， 同时也要分离出一部分细胞 ， 要加入新的培养液） ， 换液（生存空间和营养剩余 ， 但是代谢废物太多 ， 要洗洗 ， 要吃饭 ， 才能长好 ， 所以要洗和加入新鲜培养基） ， 冻存（太多了 ， 先存起来 ， 液氮里面里就是低温 ， 保存能量 ， 活得久） ， 复苏（解冻 ， 恢复吃饭的能力 ， 恢复生长 。 ）这四步 。
细胞培养的基本步骤（一定要明白每个步骤的意义和目的）：
01细胞传代（贴壁细胞）：
试剂：PBS胰酶 ， 含血清的培养基；
流程：显微镜下看一看培养皿里的细胞多不多 ， 太多（80%~90%）会导致代谢废物很多 ， 先吸掉废液 ， 再用PBS洗一洗 ， 同时太多会导致细胞黏在一起 ， 这时候就需要加点胰酶消除它们之间的粘性 ， 是否消除完 ， 在显微镜下看一看 ， 看完加入适宜的含血清的培养基 ， 中和一下胰酶 ， 这叫吹打 ， 除此之外 ， 细胞太多了 ， 把一部分细胞移出来 ， 加入适量的培养基放入孵箱继续培养 ， 这叫传代 。
02细胞换液：
试剂：PBS ， 含血清的培养基；
流程：先吸掉代谢废物（即细胞瓶中的培养液） ， 再用PBS洗一洗 ， 由于细胞长得不是很多 ， 细胞之间没有黏在一起 ， 因此不需要加入胰酶来消除它们之间的粘性 。 由于细胞要吃饭 ， 加入新鲜的含血清的培养基 ， 最后放到孵箱里面进行培养 。
03细胞冻存：
试剂：冻存液 ， PBS ， 胰酶 ， 含血清的培养基；
【细胞培养的原理和步骤，简单好用以及精确！】流程：要冻存 ， 先配置冻存液 ， 冻存液包含了：DMSO：防止在低温（零度以下至-196℃）保存细胞时 ， 细胞内液会形成冰晶 ， 渗透压会发生改变 ， 细胞结构会出现紊乱 ， 会导致细胞出现损伤 。 冻存液制备时 ， 一般需与血清一起配置：因为两者互融时 ， 会散发热量 ， 所以冻存液需提前制备 。
因为细胞太多了 ， 需要冻存 ， 所以要先看一看 ， 吸一吸 ， 洗一洗 ， 分一分 ， 中和一下 ， 吹打制成细胞悬液 ， 离心 ， 吸掉上清液 ， 加入冻存液 ， 轻轻吹吸均匀 ， 每管等量1ml装入冻存管 ， 4℃20min-20℃30min-80℃过夜 ， 最后放入液氮罐 。
04细胞复苏：
试剂：含血清的培养基；
流程：从液氮中取出冻存管 ， 迅速（小于3min）置于37℃水浴锅中 ， 解冻时 ， 边晃动边观察 ， 当看到只有一小块冰存在时 ， 即可从水浴锅中取出 ， 打开冻存管 ， 迅速将细胞悬液吸到离心管中 ， 轻轻混匀 ， 1000r/min离心五分钟 ， 吸掉上清液 ， 沉淀中加入适量培养液 ， 放入孵箱中 ， 培养 。 还有就是：复苏的细胞 ， 需要在24小时后 ， 换一次培养液 。
最后：在这里特别感谢B站上无私分享的细胞培养的视频资源 ， 正是你们的分享 ， 帮助了我 ， 我也会继续把我学到的继续分享 ， 帮助更多的人！如果大家想要获得这份视频资源的话 ， 可以在后台私聊小编获取哦 ， 里面关于细胞培养的知识讲解的超级详细！明天我会继续介绍细胞培养的一些注意事项以及WB的操作的步骤和原理 。 最后 ， 如果觉得我的推文对你有用的话 ， 请点个关注哦！
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