B造模后15d和24d取血清以及狭窄侧颈动脉标本进行-80冻存 , 进行QPCR和WB检测 , 初步判断A基因在此模型中表达量是否有差异 , 此外A基因调控的下游信号通路:例如周期或者凋亡相关信号通路是否也有差异 。
HE结果显示颈动脉造模效果
WB检测结果(A基因和内参actin)
(2)动物正式实验(此处以大鼠颈动脉狭窄模型作为案例 , 抑制剂为目标基因A的抑制剂 , 进行动物注射 , 也可以用腺相关病毒注射进行A基因的过表达或者敲低)
①对照组 , 6只
②模型组 , 6只
③模型组+抑制剂 , 6只
造模15d后 , 全部处死取材:血清、颈动脉狭窄端、粪便 , 进行生化检测、ELISA检测、HE、免疫荧光检测、QPCR、WB、16s细菌多样性检测等方法进行后续机制研究;
Α-SMA免疫荧光染色结果
对照组
模型组
模型组+抑制剂组
ELISA检测结果
【动物实验整体课题——验证基因功能常见思路解析】常规的动物造模实验都会包含预实验 , 正式实验 。 而正式实验就需要通过常规的病理染色、蛋白平台、分子平台等实验手段 , 可能还会增加微生物实验、CT扫描、TTC染色、行为学检测等 , 这些都因为模型不同研究的通路不同而有所差异 , 但是思路都是相通的 , 需要了解这个模型足够多的背景文献和已经发表的机制进展 , 进而选择可能的新机制 。
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