液滴中的单cell分泌测定
作者还证明了与单cell分泌测定法在PSDS中形成的小滴的相容性 , 表明维持cell功能和生存能力 。 首先将LNCaP cell与对多种MMP , 参与cancer cell侵袭和免疫逃逸的蛋白酶敏感的荧光底物一起载入培养基中 。 将该溶液与DCP混合 , 除去多余的液体 , 然后添加PSDS形成液滴 。 加载通常遵循泊松统计(图6A)导致占据每个液滴的cell数量分布 。 表征酶活性和膜通透性的活/死测定表明 , 细胞保持活力至少4.5小时 , 这是评估的最大时间段(图6B) 。 对于在相同缓冲溶液中但未暴露于PSDS或未保存在小滴内的cell , 活力追踪结果相似 。 cell还分泌能切割荧光底物的活性MMP , 从而导致积累的荧光信号与封装在每个液滴中的cell数量相关(R2=0.72;图6C) 。 与没有任何包囊细胞的液滴相比 , 含有单个细胞的液滴分泌MMP的水平导致可分辨的荧光信号(图6D) 。 液滴的强度随时间增加 , 其速率取决于封装细胞的数量(图6E) 。 含有相同数量cell的小滴中信号的异质性可能对应于单个细胞MMP分泌的异质性 。 作者还显示 , 响应于LNCaP cell与两种分泌抑制剂的混合物的共孵育 , 信号被显着抑制 , 表明该测定法测量了包囊细胞的活性分泌(图6F) 。
图6: 液滴中的cell分泌测定 。
参考文献:
10.1126/sciadv.abb9023
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