Southern Blot印迹杂交技术服务简介
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【Southern Blot印迹杂交技术服务简介】一、实验原理：
Southern印迹杂交（Southern blot）是1975年由英国人southern创建 ， 是研究DNA图谱的基本技术 。 Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法 。 一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段 ， 将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上 ， 经干烤或者紫外线照射固定 ， 再与相对应结构的标记探针进行杂交 ， 用放射自显影或酶反应显色 ， 从而检测特定DNA分子的含量 。
二、科沿有道实验流程：
三、科沿有道Southern杂交检测样本收集注意事项：
1.新鲜组织：
用解剖刀等迅速切成小碎块 ， 约30-100 mg ， 放入2.0 mL离心管中 ， 开盖液氮速冻15 min ， -80℃保存 ， 干冰运输 。
每个southern blot泳道提供2-3管样品 。
注：(1)解剖刀处理组织的时间尽量控制在1 min以内 。
(2)液氮速冻时必须开盖 ， 以防炸裂 。
(3)对于较难提取的植物组织 ， 如苎麻、榨菜、枣子、鱼、甘蔗、大署等 ， 1-2g样品用铝箔纸包好 ， 液氮速冻15 min ， -80℃保存 ， 干冰运输 。
2.细胞样品：
悬浮细胞1000-1500 rpm ， 5 min ， 常温离心收集细胞 。 贴壁细胞用胰蛋白酶消化后 ， 吹打收集 ， PBS洗涤细胞 ， 去除多余培养基和胰蛋白酶 。 开盖液氮速冻15 min ， -80℃保存 ， 干冰运输 。
一般情况下 ， 细胞培养的6孔板 ， 每孔细胞数量约为0.5~2×106个 。 每个离心管中的细胞数量控制在5×106个左右！每个southern blot泳道提供2-3管样品 。
3.DNA样品（双蒸水水溶解）：
2-8℃短期保存 ， -20℃长期保存；加冰块低温运输 。
科沿有道质量检测：取1-2μL的DNA进行琼脂糖凝胶电泳 ， 无蛋白质和RNA等物质污染 ， 无降解弥散 ， 条带清晰 。
科沿有道纯度、浓度检测：OD260/280=1.8~2.0 ， OD260/280＞2.0；浓度≥100 ng/μL 。
