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亲爱的小伙伴们 ， 大家好 ， 今天我们要讲解的是 ， Western Blot基本原理和配胶 ， 简单好用以及精确 ， 学完之后 ， 相信你对Western Blot基本原理和配胶将不再陌生 。 接下来就开始今天的学习吧！
Western Blot的目的和原理：
其目的是为了检测蛋白质的表达水平 。 它的原理主要是通过聚丙烯酰胺胶SDS-PAGE电泳把蛋白质按分子量大小区分开来 ， 接下来把蛋白质转移到固定的载体上 ， 例如：PVDF膜 ， 接着 ， 将目标蛋白用一抗标记 ， 然后一抗用二抗标记 ， 最后再通过显色或是显影来显示二抗 ， 从而算出一抗以及目标蛋白 。
配胶背景
当进行SDS-PAGE电泳时 ， 首先应先准备电泳相关的设备 ， 耗材和试剂 ， 电泳相关设备包括：电泳槽和电源 ， 以及制胶的配套耗材和试剂 ， 制胶的完整的配套耗材包括：首先是这么一个结构 ， 上图：
两边叫做制胶架 ， 将制胶架组合在一起 ， 变成了制胶框 ， 制胶框有两个凹槽 ， 前后分别嵌入一块长短玻璃板 ， 安装时要注意对齐 ， 对齐后 ， 要对装备的制胶设备进行密封性测试实验 ， 具体操作很简单 ， 直接往两块玻璃板的缝隙中注水 ， 直到水面接近与短玻璃板持平 ， 然后静止十分钟 ， 并观察是否有漏液现象出现 ， 如果有就重新装配 ， 如果没有 ， 就小心倒掉里面的水 。 并用滤纸吸干剩余的液滴 。
接下来开始配胶：SDS-PAGE它是一种不连续的电泳 ， 所以电泳用的凝胶包括两部分：浓缩胶在上方 ， 以及分离胶在下方 ， 配置时 ， 一般先配分离胶 ， 你可以根据目标蛋白的大小 ， 配置合适浓度的分离胶 ， 配置分离胶时 ， 需要用到：丙烯酰胺溶液 ， 过硫酸铵（APS） ， 四甲基乙二胺（TEMED）SDS ， Tris碱 ， 蒸馏水 ， 实际供应商一般会提供配置好的分离胶 ， 上图：
一定要注意：丙烯酰胺具有神经毒性 ， 操作时 ， 必须全程戴好手套 ， 另外 ， 如果你要自己配胶 ， 注意四甲基乙二胺一定要最后再加入 ， 因为他加入后 ， 会使丙烯酰胺快速聚合 。
配好的分离胶应快速用移液器加入玻璃板内 ， 分离胶的液面高度要适当 ， 加完后 ， 在上方加入异丙醇或是水 ， 使液面直至与短玻璃板顶端持平 ， 主要是为了封闭分离胶的液面以及压实分离胶 ， 使分离胶上方的液面平整 ， 然后等待十五分钟 ， 当我们看到胶和水层之间出现清晰的界面时 ， 则代表分离胶已配置完成 ， 此时需要倒掉液体 ， 多余的水分用滤纸吸干净 。 浓缩胶的配置和分离胶的配置顺序和操作流程一样 ， 配置好后 ， 在分离胶上方灌注 ， 直到液面与短玻璃板持平 ， 接下来把制胶梳子插入液面 ， 同时检查一下 ， 是否有气泡 ， 没有问题的话 ， 等待30分钟 ， 直到胶溶液完成聚合 。
最后：在这里特别感谢B站上无私分享的Western Blot的视频资源 ， 正是你们的分享 ， 帮助了当时的我 ， 我现在也会继续把我学到的继续分享 ， 帮助更多的人！如果大家想要获得这份视频资源的话 ， 可以在后台私聊小编获取哦 ， 里面关于Western Blot的知识讲解的超级详细！明天我还会继续介绍细胞培养的一些注意事项以及WB的操作的步骤和原理 。 最后 ， 如果觉得我的推文对你有用的话 ， 请点个关注哦！
【重磅：Western Blot基本原理和配胶】
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