生物|知识分享:维真生物Fection使用说明书

一、性能参数
产品名称:维真生物Fection 简称“VGF” 产品货号: FH880806
浓度:1μg/μl 推荐使用浓度:1μg-10μg/ml
规格:50μl (赠送)保存条件:2-8℃ , 切勿放-20℃
有效期至: 18个月运输条件:常温运输
使用范围:仅限科研使用 , 不能应用于临床 。

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二、产品详细描述
1、产品说明
VGF(质粒转染试剂)是一种多聚阳离子聚合物 , 具有较高的阳离子电荷密度使得聚合物网络在任何 pH 下都能充当有效的“质子海绵”(proton sponge)体 。 这种聚阳离子能将各种报告基因转入各种种属细胞 , 其效果好于脂质聚酰胺 , 经进一步的改性后 , 其转染性能好于树枝状聚合物 , 而且它的细胞毒性低 。
2、主要特点
· 高效转染各种贴壁细胞 。
· 对悬浮细胞有很高的转染效率 。
· 在同类产品中具有较高的转染效率和较低的毒性 。
· 有无血清存在(0-20%)对转染试剂的效果无影响 。
· 可用于单个质粒或多个质粒共转 。
· 转染24-72小时后 , 有高的蛋白表达量 。
3、注意事项
推荐在混合前使用Opti-MEM (Cat. No. 267485)或DMEM细胞培养基(Cat. No. SH30022.01B)稀释维真生物Fection 和核酸 。
· 转染过程中勿向培养基中添加抗生素 , 以免造成细胞死亡 。
· 不同批次实验请保持细胞接种条件相同 。
· 转染前细胞的状态好坏对最终的转染效果高低影响很大 , 请务必保证转染前 , 细胞处于良好的生长状态 。
三、质粒转染步骤
所列步骤适用于24孔板培养的哺乳动物细胞 , 其他培养材料 , 请参考表1按照转染规模调整 , 所有数量和体积均是按孔计算 。 大部分细胞系所使用的DNA(μg)与维真生物Fection(μg)的比值为1:3或1:4 , 转染状态良好的细胞可获得高转染效率、高表达水平和低细胞毒性 。
1、贴壁细胞:转染前一天每孔0.5-2×105个细胞接种于500μl培养基中 , 在转染时细胞可长至90-95%融合 。
悬浮细胞:在配制转染液前每孔4-8×105个细胞接种于500μl培养基中 。
2、转染液制备 , 每孔细胞用量如下:
A. 用50μlDMEM培养基(或者其他无血清培养基)稀释质粒DNA , 轻轻混匀 。
B. 取适量维真生物Fection 在50μl DMEM培养基中稀释 , 室温孵育5min 。
C. 将前两步所稀释的DNA和维真生物Fection 混合 , 轻轻混匀 , 室温放置30min 。
3、在每孔细胞中加入混合后的转染液 , 轻轻摇匀 。
4、贴壁细胞可在转染4-6h后可更换培养基 , 悬浮细胞可在转染后的18-48h之间 , 对细胞进行换液 。 转染18-48h之后可检测基因表达 。 如果检测到蛋白表达 , 请在转染后24-72h收集培养液 。
5、对于稳定转染 , 在转染24h后以1:10传代培养 , 第二天可加入选择培养基 。

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表1 各种细胞培养板转染推荐用量

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下图为我司VGF试剂与其他转染试剂在不同细胞中的对比图
左图为我司VGF转染试剂与市面常用的知名品牌转染试剂在转染HEK293细胞时的对比实验 , 实验结果表明 , 我司VGF的转染效率要明显超过品牌试剂转染效率;
右图为我司VGF转染试剂与市面常用的知名品牌转染试剂在转染HepG2细胞时的对比实验 , 实验结果表明 , 我司VGF的转染效率要明显超过品牌试剂的转染效率 。

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