国产新技术终于来啦！基因魔剪成了分子诊断的新帮手( 五 )

2019-01-21

经过三年不断的努力，第一代CRISDA技术已逐渐成熟。

在CRISDA反应中，Cas9蛋白就像一个具有主动搜寻功能的"开关",在找到具有某一疾病或某一特征相关的特定靶DNA序列后，能高效起始该靶核酸的指数倍“复制”过程。整个反应过程可在从室温到45度的条件下高效进行，对温度要求极低。

实验过程中，Cas9-sgRNA复合体在复杂溶液条件下主动搜寻靶核酸分子并与之结合切割，切割后的靶DNA分子被解旋并暴露出单链区域，扩增引物进一步与该区域结合形成后续扩增反应的“开关”结构。这一结构在扩增酶类的作用下，起始靶核酸分子的指数倍链取代扩增反应。

图5/8

CRISDA技术作用机理简图。（图片来源：研究团队）

“在实际应用领域，对特定序列的核酸进行检测的难度在于如何对极低浓度的靶核酸分子进行特异性高效扩增。而对特异性扩增后的产物的检测，目前市场已有多种成熟的手段，并不是技术难点。”周文华介绍说。

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