、④DNA聚合酶(DNA polymerase)[① 5 ’ →3 ’聚合活性；② 3 ’ →5 ’外切酶活性；③ 在无dNTP时 ， 可以从任何3 ’ -OH端外切；④ 在只有一种dNTP时 ， 外切至互补核苷暴露时为止；⑤ 在有4种dNTP均存在时 ， 聚合酶活性占主导地位 。
、⑤核酸酶(nuclease)[① 降解ssDNA或ssRNA形成5’p末端的单或寡核苷酸 ， 对DNA活性强于>RNA;② 中量S1可从切口或小缺口处降解dsDNA;③ 极大量的S1才能降解dsDNA或DNA-RNA杂交链 ， 原因是后者对S1降解有抗性 ， 所以S1又称单链特异的核酸酶 。
、⑥末端转移酶[① 催化一个单核酸（dNTP）加到另一个DNA分子的3’－OH末端；② 平端或带延伸3’－OH末端的dsDNA需要Co2＋存在才能作模板 ，
(terminal transferase)、⑦碱性磷酸酶[① 去除DNA、RNA和dNTP的5’磷酸根；② 去除5’p， 防止DNA片段或载体自身环化 。 ③ 32p标记5’p末端前 ， 先用其去除DNA或RNA上的5’p
(BAP或CIP) 。
（5）在分子克隆中要作为载体需要哪些条件？
要把一个有用的基因（目的基因-研究或应用基因）通过基因工程手段送到生
物细胞（受体细胞） ， 需要运载工具携带外源基因进入受体细胞 ， 这种运载
工具就叫做载体（vector）
载体所具备的特征① 能在宿主细胞中大量复制 ， 得到大量的重组DNA分子；② 载体上的内切酶位点对于一种酶来说只能有一个（置换型载体上被置换片段的两侧各有一个内切酶位点）；③ 克隆载体要有复制起点 ， 表达载体要有启动子④ 载体上要有报告基因或选择标记基因⑤ 在不影响载体复制和表达的DNA序列上有内切酶酶切位点⑥ 具有较高的外源DNA装载能力 。
5.限制性核酸内切酶3’5’端的标记 ， 再用DNA聚合酶聚合 ， 末端有何变化？再用DNA连接酶连接 ， 再酶切 ， 是否能形成相同的末端？
Ⅱ型酶识别的特殊DNA序列称为限制酶的识别位点（或切割位点） 。 它能识别dsDNA的4~6bp的回文序列并水解该部分的核苷键 。 一般来说是4~6bp ， 有6个以上的 ， 但没有4个以下的 。 识别顺序呈二重对称 ， 即180°旋转对称 。
形成平头末端（bluntend）PvuⅡⅠ等形成的平头末端
粘性末端（sticky end）：限制酶切割产生2个突出的末端称之 ， 作用是放在一起自发形成双链 。
6.应用（判断动物功能 ， DNA分子体外重组 ， 体外表达的过程）
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