哺乳动物乳酸脱氢酶 (LDH)作为五个四聚体同工酶存在 ， 由两个不同亚基的组合组成 。 H亚基在心肌中占主导地位 ， 适合丙酮酸的有氧氧化 。 M亚基在骨骼肌中占主导地位 ， 更关注无氧代谢和丙酮酸减少 。
单位定义：一个单位在 25°C、pH 7.3下每分钟氧化1微摩尔NADH
请注意 ， 哺乳动物乳酸脱氢酶 的来源已从天然兔肌肉形式变为在大肠杆菌中表达的重组体 。 重组酶达到或超过先前提供的天然酶的规格 。
艾美捷Worthington牛心LDH的特点：
分子量：35000/亚基（Fosmire和Timasheff 1972） 。 136700±2100/四聚体(Huston et al . 1972) 。
组成：Vallee和Williams (1975)报道了它在低pH条件下的亚基解离 。 另见Yang和Schwert (1972)以及Gold和Segal (1965) 。
消光系数：消光系数=14.9 。
活动：参见 Borgmann等人 。 （1974） 。
【Worthington哺乳动物乳酸脱氢酶研究——特点及测定方案】特异性：该酶对 L(+)乳酸具有特异性 。 Meister (1950)报告说它可以减少几种 α-酮酸和 αβ-二酮酸 ， 但减少丙酮酸的速度大约是十分之一 。
抑制剂：LDH相当稳定 。 它被碘化物灭活 。 对汞苯甲酸盐的抑制作用很慢 。 见Schwert和Winer (1963)；还有安德森等人 。 (1974)和Bloxham等人 。 （1975年） 。
活化剂：George等人报道了许多稳定酶的有机化合物 ， 例如二甲亚砜、乙醇和甲醇 。 （1969年） 。 己烯雌酚及其几种衍生物也可以稳定酶（Cohen et al . 1969） 。
来自兔肌肉的 LDH的特征：
分子量：140000 。
组成：Lovell和Winzor (1974)报告说 ， 四聚体在pH为5的醋酸盐-氯化物缓冲液中完全解离成两个二聚体（分子量70000）（对牛心LDH没有影响的条件） 。 磷酸盐和吡啶核苷酸稳定四聚体的四元结构 。 磷酸盐具有活化作用 。 另见Cho和Swainsgood (1973) 。
活性：Stambaugh和Post (1966)以及Zewe和Fromm (1965)报告了反应动力学 。
艾美捷Worthington乳酸脱氢酶的测定：
Method :反应速度由NADH氧化导致的340 nm处吸光度降低来确定 。 在指定条件下 ， 在25°C和pH 7.3条件下 ， 一个单位每分钟会氧化1微摩尔NADH 。
试剂:
0.2 M Tris?HCl ， pH 7.3
6.6 mM NADH在高于0.2 M Tris?HCl缓冲液 ， pH 7.3
30 mM丙酮酸钠在0.2以上Tris?HCl缓冲液中 ， pH 7.3
酶:
以 1 mg/ml溶解在0.2 M Tris?HCl缓冲液中 。 使用前稀释酶以获得0.02-0.04ΔA/min的速率 。 在Tris缓冲液中并保持低温 。
Worthington哺乳动物乳酸脱氢酶蛋白质浓度的测定：
程序：
将分光光度计设置为 340 nm和25°C 。
移液器如下：
Tris?HCl 0.2 M pH 7.3 2.8毫升
6.6毫米NADH 0.1毫升
30 mM丙酮酸钠 0.1毫升
在分光光度计中孵育 4-5分钟以达到温度平衡并建立空白率（如果有） 。
加入 0.1 ml适当稀释的酶 ， 并从初始线性部分记录 ΔA 340 /min 。
推荐阅读
- 海底的深处能看见什么, 专家, 还存在啊（下）
- 食品微生物检测仪准确度高
- 科学家：10000年前，第六次大灭绝有可能已经开始，人类怎么办？
- 野生动物的子女离开父母多年后，还会认得自己的父母吗？为什么？
- 地球上唯一会飞的哺乳动物——蝙蝠是怎么睡觉的?
- 在北极漂泊389天后，数百科学家带回一个噩耗：北冰洋正在死去
- 地球生命发展史上，为什么是先出现恐龙才出现的人类？
- 自然界太残忍！鲸鱼不会自然死亡，竟然是被活活淹死的?
- 与动物相比，人类女性生孩子为什么如此困难？