免疫共沉淀图怎么看 免疫共沉淀的图
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1、分清Input和IP，再者就看用什么抗体IP 。
2、Input样品中有A和B蛋白，如果用A蛋白的抗体IP，A蛋白可以富集，在IP的样品中若同样可以检测到B蛋白的存在，说明A和B蛋白互作 。
3、将预处理过的10μl protein A 琼脂糖珠加入到和抗体孵育过夜的细胞裂解液中4°C缓慢摇晃孵育2-4h ， 使抗体与protein A琼脂糖珠耦联 。
4、免疫沉淀反应后，在4°C 以3,000 rpm 速度离心3 min，将琼脂糖珠离心至管底；将上清小心吸去，琼脂糖珠用1ml裂解缓冲液洗3－4次；最后加入15μl的2×SDS 上样缓冲液，沸水煮5分钟 。
5、实验过程：（1）转染后24-48 h 可收获细胞 ， 加入适量细胞裂解缓冲液（含蛋白酶抑制剂） ， 冰上裂解30min, 细胞裂解液于4°C，最大转速离心30 min后取上清 。
6、（2）取少量裂解液以备Western blot分析 ， 剩余裂解液加1μg相应的抗体加入到细胞裂解液，4°C缓慢摇晃孵育过夜 。
7、（3）取10μl protein A 琼脂糖珠，用适量裂解缓冲液洗3 次 ， 每次3,000 rpm离心3 min 。
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