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AbMole精研抑制剂十年 , 最新的科研动态不断与您分享 。 本期与您分享的是:血小板释放的三磷酸腺苷 (ATP) 的优化生物发光分析及其在血小板抑制剂高通量筛选中的应用 。
活化的血小板释放三磷酸腺苷 (ATP) , ATP 释放的生物发光分析通常用于监测各种兴奋剂诱导的血小板活化 。 然而 , ATP 的生物发光分析线性差 , 信号衰减快 , 血小板释放 ATP 的准确性难以准确确定 , 无法用于血小板抑制剂的高通量筛选 。 本研究旨在优化血小板释放的 ATP 的生物发光分析 , 并扩大其在血小板抑制剂的高通量筛选中的应用 。 结果表明 , 添加辅酶 A (CoA) 显着提高了 ATP 分析的准确性 , 并且在 Hank 平衡盐溶液 (HBSS) 和 Tyrode 缓冲液中添加牛血清白蛋白 (BSA) 大大推迟了 ATP 分析的信号衰减 。 此外 , 我们对 ATP 的优化生物发光分析准确确定了活化血小板的 ATP 释放以及 Ly294002 和 Staurosporine 对平板活化的抑制作用 。 因此 , 我们成功构建了优化的 ATP 生物发光分析 , 可用于血小板抑制剂的高通量筛选 。
Staurosporine (Abmole M2066纯度99.68%) 是一种治疗剂 , 通过内在凋亡途径诱导细胞死亡来抑制肿瘤细胞生长 。 Staurosporine 是一种原型 ATP 竞争性激酶抑制剂 , 因为它以高亲和力与许多激酶结合 , 但选择性很小 。
Fig 6. Screening of platelet inhibitors with optimized bioluminescence analysis of released ATP.
在优化释放的ATP生物发光分析的基础上 , 分析了Ly294002和Staurosporine 对活化血小板ATP释放的抑制作用 , 并评估了ATP生物发光分析在筛选血小板抑制剂中的应用价值 。 如图 6 所示 , Ly294002 和 Staurosporine 均对凝血酶诱导的活化血小板的 ATP 释放表现出抑制作用 , 并且它们在 HBSS 和 Tyrode 缓冲液中表现出相似的抑制作用 。
【血小板释放的ATP优化生物发光分析及其在抑制剂高通量筛选中应用】鸣谢:Lili Wang et al. PLoS One. 2019 Oct 10;14(10):e0223096.
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