汉腾生物：盘点抗体下游纯化工艺开发过程中S/D病毒灭活注意事项 _抗体

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汉腾生物专注于大分子领域工程细胞系培养和开发、上下游工艺开发、制剂工艺开发、大分子分析方法开发等服务，其中，在下游纯化工艺开发过程中拥有丰富的经验积累。今天跟大家聊聊，对于抗体下游纯化工艺开发过程中病毒灭活注意事项。
大家最常用到的病毒灭活方法为低pH法，抗体类产品的病毒灭活方法也多为此法，因为IgG类产品能够耐受较低的pH环境。但对于不耐受低pH的重组蛋白或其他抗体，该选用什么病毒灭活方法呢？今天我们将介绍另一种可以有效灭活病毒且操作简单的方法——S/D病毒灭活法。

什么是S/D病毒灭活法？
S即solvent ，指有机溶剂；D即detergent ，指去垢剂， S/D病毒灭活法即指采用有机溶剂和/或去垢剂对产品中可能存在的病毒颗粒进行灭活，使其失去感染活性的一种病毒灭活方法。
S/D法病毒灭活原理是什么？
S/D法主要灭活脂包膜病毒，对非脂包膜病毒无效。 S/D通过溶解脂包膜使其中的核酸颗粒暴露于试剂中，病毒颗粒失去脂包膜而不能与细胞表面结合或进入细胞，从而失去感染能力。
常用S/D试剂有哪些？
S/D病毒灭活时，最主要使用的有机溶剂为TNBP；最主要使用的非离子型去污剂为Triton X-100、Tween 80 ，其中Triton X-100去垢剂能力更强。病毒灭活时， TNBP可单独使用，也可以与去垢剂中的任意一种联合使用。
值得注意的是， Triton X-100因其降解产物具有hormone-like活性，对水生生物具有毒性，造成环境污染， 2017年被欧洲化学药品管理局（ECHA）列为重点关注物质，凡在欧洲经济区（EEA）使用该物质都将受到严格管控。
S/D病毒灭活法常用关键工艺参数是什么？
S/D病毒灭活时，需要严格控制试剂用量、操作温度、灭活时间，常用操作方法如下：

需要注意的是，在加入S/D试剂前，应先将样品溶液用1μm滤器过滤去除掉杂质颗粒，防止包裹在颗粒中的病毒影响灭活效果。此外，灭活全程均需要控温在规定范围内；除了在加入S/D试剂时需要搅拌使样品与试剂充分混匀外，在灭活全程也需要轻柔搅拌，以保证溶液中S/D浓度的均一性与温度的均一性。
S/D病毒灭活效果如何？
根据Merck S/D病毒灭活一次性产品应用中的测试数据显示， S/D法无论采用TNBP+Tween80或TNBP+Triton X-100 ，都表明在人血液制品与人IgG产品中具有良好的病毒灭活效果，具体如下：

注：此部分数据均摘录于Merck《Sovent-DetergentViral Inactivation of Plasma-Derived Products in Mobius Single-Use Process Containers》
S/D残留如何去除？残留限度是多少？
S/D存在一定的生理毒性，因而在病毒灭活完成后必须予以去除。我们在纯化过程中采用的亲和层析、离子交换层析、疏水层析等涉及目的蛋白结合模式的层析，都能有效去除产品中的S/D试剂。此外， 5%植物油萃取、C18吸附S/D层析都是不错的清除方法。
根据WHO发布的病毒安全指导原则与国家药典委员会主持编写的《治疗用生物制品病毒污染风险控制要点》，各试剂残留限度控制如下：
【汉腾生物：盘点抗体下游纯化工艺开发过程中S/D病毒灭活注意事项】
病毒灭活与去除作为生物制药过程中病毒污染风险控制的关键环节，其病毒灭活效率是保证产品病毒安全的重要控制策略。目前市面上较为常见的治疗性生物制品主要为抗体类，多采用低pH孵育法灭活病毒，这也是大家所熟知的病毒灭活方法。汉腾生物作为赋能生物制药领域的CDMO企业，所承接生物制品种类繁多，其中除了抗体类产品外，也涉及不耐受低pH环境的重组蛋白类生物制品，对于此类产品的病毒灭活，我们需要采用其他可兼容目的蛋白稳定性的方法，如国际通用的另一种病毒灭活法——S/D法。
汉腾生物结合自身所承接生物制品生产工艺开发经验，考虑到生物制药企业类同行们在纯化工艺开发过程中可能碰到不能采用低pH病毒灭活方法的实际问题与需求，因而对S/D病毒灭活方法的原理、方法及灭活效果进行了总结，并强调了此法操作过程中需要重点控制的关键工艺参数、以及应用此法所引入工艺杂质的去除与残留控制等相关问题，为大家提供了除低pH孵育法之外的另一种行之有效的病毒灭活思路。

汉腾生物：盘点抗体下游纯化工艺开发过程中S/D病毒灭活注意事项

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