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THP-1细胞传代操作
如果THP-1单核细胞密度达80%-90% ， 即可进行传代培养
方法一：收集THP-1细胞 ， 1000RPM条件下离心3-5min分钟 ， 弃去上清液 ， 补加1-2ml培养液后吹匀 ， 将细胞悬液按1:2的比例分到新的含10ml培养基的新皿中或者瓶中 。
方法二：可选择半数换液方式 ， 弃去半数培养基后 ， 将剩余THP-1细胞悬起 ， 将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中 。
备注：第一次传代时 ， 若培养基中有THP-1细胞碎片 ， 则将细胞悬液装入无菌离心管中 ， 1000 rpm离心4 min ， 弃去上清液 ， 补加1-2 mL培养液后吹匀 ， 按1:1分到新的装有10mL新鲜培养基的培养皿中 ， 置于培养箱中培养 。
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THP-1细胞冻存步骤
待THP-1单核细胞生长状态良好时 ， 可进行细胞冻存 。 下面 T25 瓶为例
1.收集THP-1单核细胞及细胞培养液 ， 装入无菌离心管中 ， 1000 rpm条件下离心4 min ， 弃去上清液 ， 用PBS清洗一遍 ， 弃尽PBS ， 然后进行细胞计数 。
2.根据THP-1单核细胞数量对应加入无血清细胞冻存液 ， 使细胞密度5×10^6~1×10^7/mL ， 轻轻混匀 ， 每支冻存管冻存1mL细胞悬液 ， 注意冻存管做好标识 。
3.将冻存管放入-80℃冰箱 ， 24 h后转入液氮灌储存 。 记录冻存管位置以便下次拿取 。
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THP-1细胞培养特别注意
1.THP-1属于悬浮细胞 ， 显微镜下可见细胞呈圆形 ， 透明度高 ， 背景干净 ， 碎片很少 ， 说明细胞状态很好 。
2.THP-1常用RPMI 1640培养基 ， 含10%胎牛血清 ， 在37度、5% CO2培养箱中培养 。 特别注意的是THP-1喜欢酸性环境 ， 对培养基pH值的变化很敏感 ， 通常培养基颜色呈橘红色时细胞最适宜生长 。 所以尽量使用相同Ph的1640 。
3.THP-1细胞有密度依赖性 ， 低密度时细胞生长慢 ， 建议细胞量维持在每毫升50-100万为宜 ， 超过10^6/ml即可传代 ， 传代比例采用1:2~1:3 ， 换液不需要太频繁 ， 正常2~3天换1次液即可 。
注意细胞的密度一定要高 ， 介于5×105—— 106/ML之间 ， 增值的快 。 细胞数量太少 ， 不适合THP-1生长 ， 一般状态不好的THP-1在培养了3天后数量仍然不多 ， 继续培养一天或者两天 ， 培养基严重泛黄 ， 细胞数会增加 。 这一点不同于同是单核细胞系的U937细胞 。
4.传代后切忌常移出培养箱观察 ， 否则会影响细胞生长 ， 状态变差 ， 一般首先表现为细胞内颗粒变多 。 一般THP-1 生长相当快 ， 对于状态已经不好的情况 ， 建议传代后3～4天再观察 ， 一般4天时间培养基已明显泛黄 ， 细胞数量巨增 。
5.THP-1细胞培养时需要添加0.05mM的β-巯基乙醇 。
常见问题
1
THP-1细胞收货时出现伪足 ， 或碎片较多
受到运输影响 ， 悬浮细胞会短暂性出现形态改变的现象 ， 如伪足等 。 通过传代培养 ， 1周左右可以恢复正常 。 一些THP-1细胞在运输途中死亡而产生碎片 ， 通过传代离心可以去除 。
处理方法
收集THP-1细胞 ， 1000RPM条件下离心3-5min分钟 ， 弃去上清液 ， 补加1-2ml培养液后吹匀 ， 将细胞悬液重新分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中 ， 置于培养箱中培养 。
2
THP-1细胞培养过程中细胞发生贴壁
THP-1细胞培养过程中出现少量细胞贴壁属于正常情况 ， 不需要担心 。 可以轻吹收集细胞或者丢弃贴壁部分细胞 。
处理方法
只需将THP-1细胞悬液转移至新瓶中即可 。 但如果当贴壁细胞的比例高于20% ， 说明细胞生长环境有异常 ， 这时候就需要排查培养箱设置、培养基成分 ， 以及培养器皿是否异常 。
3
HP-1细胞培养过程中细胞发生聚团
THP-1细胞培养过程中出现少量细胞聚团 ， 呈葡萄串状 ， 属于正常现象 ， 特别是THP-1细胞密度较低时 ， 易出现这种情况 。
处理方法
可以更换血清品牌或增大血清比例（不超过20%）有助于解决聚团问题 。 不建议将聚团的细胞吹散 ， 等待密度高时 ， 会自己分散开 。
4
THP-1培养基一定要加β-巯基乙醇吗
β-巯基乙醇是一种常用的培养补充剂 ， 有抗氧化的作用 ， 可减少氧化应激对THP-1细胞的影响 。 当细胞密度过大但需要维持时 ， 可适当增加巯基乙醇的比例（不超过标准量的1.5倍） 。
5
THP-1细胞镜下观察时 ， 难以聚焦或估算密度怎么办
THP-1细胞形态特征悬浮生长 ， 悬浮细胞会随着液体流动 ， 不容易聚焦 ， 静置5-10分钟使细胞沉底 ， 之后再轻轻放上显微镜观察 ， 将有助于聚焦和估算细胞密度 。
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