文章图片
文章图片
自新冠肺炎病毒传播以来 ， 新冠核酸快速检测已经成为了我们的日常 ， 虽然已经习以为常 ， 但是我们对新冠核酸快速检测实验室内如何操作还是不太清楚 。 今天 ， 我们将从新冠病毒生理特性、荧光PCR原理、PCR实验室扩增常见问题等几个方面讨论 。
首先是新冠病毒的生理特性：新型冠状病毒属于RNA病毒 ， 是β属冠状病毒 ， 具有包膜 ， 颗粒呈圆形或者椭圆形 ， 直径为60-140nm ， 具有5个必需基因 ， 分别是病毒包膜、核蛋白、基质蛋白、棘突蛋白以及RNA依赖性RNA聚合酶 。 新型冠状病毒的核蛋白包裹RNA基因组构成核衣壳 ， 外有病毒包膜 ， 而包膜中包埋棘突蛋白和基质蛋白 ， 棘突蛋白会通过血管紧张素酶转换酶Ⅱ进入细胞 。 临床上在体外培养时发现 ， 感染96小时后即可在细胞中发现新型冠状病毒
其次 ， 是荧光PCR原理：对病毒核酸重复进行“变性 - 退火 - 延伸” 三个过程 ， 模板DNA的量就会呈指数倍增加 ， 理论上讲经过n 个循环之后 ， 模板量就会达到2的n次方 。
【达安科普：PCR实验室新冠核酸快速检测最常遇见的问题】
再来 ， 便是我们在新冠核酸快速检测实验室中进行PCR扩增与分析时常见的情况了 。 、
① 扩增曲线末尾起跳
什么是末尾起跳？末尾起跳就是PCR实验新冠核酸快速检测结果中有曲线出现末尾起跳但是没有完整扩增的现象 。 其原因有多种 ， 常见的有以下三种（1）阴参曲线末尾起跳 ， 通常表示存在污染；（2）非特异性扩增的可能性；（3）正常样本也可存在曲线末尾起跳 ， 表示样本浓度低或者加样量不准确 。
② 阴性对照或空白对照起线翘尾
如果是个别单一通道翘尾 ， 不管是FAM还是VIC通道 ， 首先按照要求复查 ， 复查建议重新采样 ， 如果不方便则重新采样建议对原有样本进行重新提取核酸验证 ， 如果复查阴性判读阴性 ， 如果复查还是同一通道翘尾 ， 就要对结果仔细审核 ， 一是要排除实验室污染 ， 二是要对病人信息了解清楚 ， 从临床症状及接触史排查 ， 如果没法确认 ， 建议必须重新采样复查 ， 如有必要可以采用另一家试剂来验证 。 如果出现大量的弱阳性扩增翘尾 ， 首要原因是考虑新冠核酸快速检测实验室污染 ， 可以通过做环境样本和阴性对照做验证排除 。
③ 新冠核酸快速检测结果和临床诊断不符合 ， 是什么情况？
由于新冠病毒是RNA病毒 ， 容易降解 ， 另外新冠核酸快速检测结果也和取样 ， 核酸提取以及样本本身的核酸浓度有关 ， 需要逐一分析 ， 同时可以结合临床症状判读 。 此外 ， 可以仔细阅读相关的新冠诊疗指南 ， 对新冠患者确诊、患者诊疗、解除隔离等标准进行多方比对 ， 确保新冠核酸快速检测合理性 。
新冠核酸快速检测是一项严谨的实验 ， 其灵敏度及精密性已经经过了重重验证 。 随着新冠疫情的发展及防控需求 ， 新冠核酸快速检测应运而生 ， 数十分钟内得到结果 ， 更适配多种紧急场景如机场、海关、车站、发热门诊的需求 。
推荐阅读
- 华林科纳研究抗蚀剂剥离和清洗对USJ性能的影响报告
- 科学家发现太空异常引力带，由此推测第九颗行星存在，可能吗？
- 地球上万物都是相生相克，但没听说过病毒有天敌，病毒害怕什么？
- 此次新冠大流行何时结束？中科院院士黄建平团队，做出最新预测
- 全面超越“龙”飞船？新一代载人飞船2年前已首飞，晋升第一梯队
- Cell 子刊：CHD8单倍不足影响兴奋性和抑制性神经元发育轨迹
- 乙肝探索有机小分子前景，优化含氮杂环化合物，发现吡唑衍生物61
- 恐龙灭绝新证据！美国发现一恐龙遗骸，来自6600万年前大灾难那天
- 42岁王亚平大校军衔，国内首位太空漫步女宇航员，下舷梯后她哭了