如何养好HUVEC人脐静脉内皮细胞( 二 )
常见问题
1
何时须更换培养基
视细胞生长密度而定 , 常规细胞2-3天更换培养基 。
2
何时进行传代
细胞密度达80%-90% , 即可进行传代培养
首次传代建议1:2传代 , 就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿 。 不是1个T25瓶传2个10cm皿 。
3
细胞冻存浓度是多少
1*10^6-1*10^7之间都可以 。
4
冻存细胞数量计算
如果是有要求每管要冻多少细胞 , 那就用1ml完培重悬后 , 取部分按平时方法计数 , 剩下的细胞按计数需要的细胞量冻存即可
如果没要求 , 那就按平时 , 一个皿冻一管 。
5
可否使用与原先不同培养基
不能 。 每一细胞株均有其特定使用且已适应的细胞培养基 , 若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基 , 细胞大都无法立即适应 , 易造成细胞状态不好 , 最终造成细胞无法存活 。
【如何养好HUVEC人脐静脉内皮细胞】6
可否使用与原先不同血清种类
不能 。 血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源 , 所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响 。 来自不同物种的血清 , 在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同 , 血清使用错误常会造成细胞无法存活 。
7
影响细胞长得慢因素
A.没有保证密度 , 细胞长不起来
B.操作时力度没控制好 , 将细胞吹碎 , 状态变差
C.血清质量不好 , 影响细胞生长
8
贴壁不牢的细胞到货处理流程
A:到货后先稳定4-6小时 将培养瓶内全部培养基收集到50ml管内 , 再用pbs润洗 , pbs也收集到50ml管中 。 将上述上清1000rpm离心3min后 , 去上清 , 加入pbs重悬细胞沉淀 。 1000rpm离心3min后 , 去上清 , 加入胰酶1-2ml , 重悬细胞沉淀 , 静置1-2min , 加入2-4ml完培终止消化1000rpm离心3min后 , 将细胞铺到新的6cm皿或T25瓶中 , 镜下观察如有成团细胞 , 轻轻吹开即可 。
B:T25瓶内贴壁细胞按正常步骤操作收集细胞即可 。 将A和B都一起铺到同一个皿里摇匀后 , 放培养箱培养 。
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