如何养好HUVEC人脐静脉内皮细胞

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HUVEC培养说明
HUVEC细胞来源于人静脉内皮，可在半固体培养基中形成克隆，在免疫抑制小鼠中不能形成肿瘤。 HUVEC细胞可用于血管内皮修复损伤的研究。
操作指南
产品参数01
HUVEC细胞基本信息
人脐静脉内皮细胞HUVEC
名称：HUVEC人脐静脉内皮细胞
来源：脐静脉
特性：贴壁生长
形态：上皮细胞样
来源：IMMOCELL
支原体：无
推荐传代比例：1:2至1:3
推荐换液频率：2~3次/周
倍增时间：~23.5 hours
冻存液：无血清冻存液，液氮储存
规格：1x10^6cells/T25
培养条件气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃
HUVEC细胞培养基

内皮细胞
ECM完全培养基
HUVEC细胞免疫荧光鉴定图
>>检验基本情况
经免疫荧光鉴定， HUVEC细胞纯度达到95%以上
到货处理
02
HUVEC细胞收货处理复苏细胞T25瓶

复苏HUVEC细胞
1.收到HUVEC细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生及时和我们联系；

2.用75%酒精消毒瓶壁，将T25瓶置于37℃培养箱放置2-4h ，显微镜下观察细胞状态；
3.给收到的细胞拍照(10x20x)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。
冻存细胞冻存管

冻存HUVEC细胞
1.收到HUVEC细胞后，若发现干冰已挥发干净，冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即拍照并与我们联系；
2.为保证细胞的高存活率，收到细胞后，需立即转入液氮冻存或直接复苏。
收货注意事项
1.如果使用培养瓶，在将其放入培养箱前，应将封口膜去掉，瓶盖旋松，以便进行充分的气体交换
2.仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致
培养指南
03
HUVEC细胞培养操作说明
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HUVEC细胞复苏步骤
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min ，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜）。
第二天换液并检查HUVEC人脐静脉内皮细胞密度。
请客户用相同条件的培养基用于细胞培养

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HUVEC细胞传代操作
如果HUVEC细胞密度达80%-90% ，即可进行传代培养
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02%EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有HUVEC人脐静脉内皮细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3 min ，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若HUVEC细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中， 1000 rpm离心4 min ，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
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HUVEC细胞冻存步骤
待HUVEC细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例
1.收集HUVEC人脐静脉内皮细胞，装入无菌离心管中， 1000 rpm条件下离心4 min ，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS ，然后进行细胞计数。
2.根据细胞数量对应加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×10^6~1×10^7/mL ，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
3.将冻存管放入-80℃冰箱， 24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
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温馨小贴士
1.为防止回收培养基时操作造成污染，运输用的培养基（灌液培养基）建议不再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞
2.收到细胞后第一次传代建议1：2传代

如何养好HUVEC人脐静脉内皮细胞

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