恶性肿瘤|【shRNA慢病毒文章分享】Bioactive Materials ‖湖南大学胡小晓团队揭示核…( 二 )

2022-01-05

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图1.HT1080细胞与Cy5-S11e(红色)和Mito-tracker及Lyso-track(绿色)的共定位
2. S11e特异性识别肿瘤组织
核酸适体识别体内肿瘤的能力是评价能否应用于临床的重要指标。为此作者将修饰后的核酸适体通过尾静脉注射小鼠，发现注射后5min ， S11e在肿瘤部位的荧光信号增强，而Library在肿瘤部位未见明显荧光信号，说明S11e在肿瘤部位聚集。通过观察Cy5标记的S11e在小鼠体内的生物学分布，发现S11e在体内具有靶向纤维肉瘤的能力。

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图2. S11e在HT1080异种移植小鼠模型中的荧光成像
作者进一步通过将Cy5和Cy5标记S11e与纤维组织病理切片共同孵育，发现正常组织中未见红色Cy5荧光信号，良性肿瘤组织中可见轻微红色荧光信号，恶性肿瘤组织中可见强红色荧光信号，表明S11e在体外可以识别纤维肉瘤组织。

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图3.S11e识别患者组织样本中的肿瘤细胞
3. S11e促进纤维肉瘤细胞凋亡并引起相关蛋白表达的改变
为研究S11e的生物学功能，作者进行了细胞毒性实验。分别用S11e和Library （随机文库）处理HT1080细胞后，细胞活力分别为49.08%和93.42% ，说明S11e而不是Library对HT1080细胞具有细胞毒性作用。综上所述， S11e可有效诱导HT1080细胞凋亡，提示S11e对肿瘤细胞具有潜在的治疗作用。

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图4. S11e或Library对HT1080和MRC-5细胞毒性分析
接下来，作者利用Western blotting实验对S11e诱导HT1080细胞凋亡的途径进行了进一步探究。发现HT1080细胞与S11e孵育后， cleaved- caspase -9 (37 kDa)、cleaved- caspase -3 (17 kDa)和cleaved- PARP (89 kDa)的表达增加。当Caspase-9被激活时， Caspase-3被激活， Caspase-3进一步切割凋亡的关键酶PARP ，直接诱导凋亡。这些结果表明， S11e特异性地通过线粒体介导的内源性凋亡途径诱导细胞凋亡。

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图5. S11e或Library 处理后， HT1080细胞中凋亡蛋白的表达
4. Diablo/SMAC是S11e结合的功能性细胞蛋白
接下来，作者探究了与S11e结合的功能性细胞蛋白。有趣的是，在S11e处理的细胞中特异检测到分子量为85 kDa和20 kDa的两条蛋白带，而在Library处理的细胞中检测不到。通过重点筛选分子量在15-25 kDa至70-90 kDa之间的蛋白，然后用S11e与Library的评分比对其进行排序，发现Diablo/SMAC (21 kDa)在凋亡触发后可以从线粒体膜间隙释放到细胞溶胶，与其他攻击相比排名较高。因此，作者推测Diablo/SMAC是S11e的潜在结合靶点。

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