知识科普|【维真生物-慢病毒包装】慢病毒包装原理及步骤( 四 ) 生物|细胞|整合|纯化|包装|di

③第二天感染目的细胞
取出提前准备好的96孔板，用准备好的病毒稀释液替代旧培养液，注意保留未加入病毒的细胞孔作为对照组。
④第二至十天观察荧光或检测
慢病毒对细胞的感染较慢，请在感染细胞后48、72、96、120小时分别观察细胞中荧光表达情况（如果您选择的产品不带有荧光标签，请在48、72、96、120小时分别收获细胞并通过 Western-Blot 或其他检测手段来检测基因表达）。
注意：
由于不同细胞对慢病毒感染过程的承受能力不同，在加入病毒稀释液后，请于12-24小时后观察细胞状态以确认加入的病毒量是否合适。
3.1.2 慢病毒感染目的细胞
进行慢病毒感染实验时可使用完全培养液（培养目的细胞用）稀释。培养液中的血清、双抗或其他营养因子不会影响慢病毒的感染效率。
以24 孔培养板为例，进行HEK293细胞的感染实验操作步骤如下：
注意：
实验前请按照不同的MOI 设置不同的感染孔，并根据MOI 和细胞数量计算所需要的病毒量。
最适病毒用量的计算公式：病毒用量TU=最佳MOI×细胞数目/病毒滴度
例如, 如果您目的细胞的最佳MOI=10 ，您需要感染106的细胞，那么您共计需要107 TU的病毒. 如果病毒滴度为1×108 TU/mL, 那么您实验需要的病毒量就是100μL.
① 第一天细胞的准备
在24孔培养板接种若干孔，每个孔内接种3-5×104个HEK 293细胞，铺板时细胞的融合率为50%左右，每孔培养液体积为300μL ，进行病毒感染时细胞的汇合度约为70% 。
②第二天病毒的准备
根据实验的实际情况和MOI 值，用培养液准确稀释慢病毒原液。
注意：
可使用PBS缓冲液或无血清培养液稀释病毒原液。
③第二天感染目的细胞
在目的细胞和对照细胞中分别加入计算好的病毒液，混匀后放于CO2培养箱（37 ℃、5% CO2）孵育过夜。
注意：
1）感染前细胞的状态好坏对最终的感染效果高低影响很大，请务必保证加入病毒前，细胞处于良好的生长状态。
2）若慢病毒对目的细胞的感染效率较低，可通过提高MOI 值提高病毒的感染效率，也可在培养液中加入维真生物助感染试剂ADV-HR来提高病毒的感染效率。
【知识科普|【维真生物-慢病毒包装】慢病毒包装原理及步骤】④第三天更换培养液
病毒感染细胞24小时后，更换培养液。
注意：
换液具体时间需视细胞状态而定。如果慢病毒对细胞有明显毒性作用，影响细胞生长状态，最短可于加病毒4小时后更换新鲜培养液后继续培养。
⑤第六天感染效率检测
在倒置荧光显微镜观察荧光，计算慢病毒感染目的细胞的效率。如选择的慢病毒载体不带有荧光标记，可以通过Q-PCR(定量PCR)检测目的基因的表达来评估感染效率。

知识科普|【维真生物-慢病毒包装】慢病毒包装原理及步骤( 四 )

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